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Symmetry色谱柱使用窄径柱和小粒径柱需要注意的问题及优化建议

更新时间:2024-09-27      点击次数:253

a. 使用窄径(内径<3.0 mm)色谱柱

  本节将介绍如何尽量减少柱外效应,并介绍在HPLC系统中尽可能提高窄径色谱柱性能的原则。使用内径3.0 mm的窄径色谱柱时通常无需更改系统配置。但使用内径2.1mm的色谱柱时,需要更改HPLC系统配置才能避免系统谱带展宽体积过大。如果不恰当地更改系统配置,会因系统谱带展宽体积过大而导致峰展宽,随着峰体积减小,这会对峰宽造成严重影响。

 

b. 谱带展宽体积对内径2.1 mm的色谱柱性能的影响

注:在色谱柱后使用分流器会加剧谱带展宽。

  系统优化可能对灵敏度和分离度产生巨大影响,对于配置了分流器的系统尤其如此。优化措施包括使用深度正确的锥箍以及尽可能减小管路内径和长度。图9给出了一个示例,通过

优化LC-MS/MS系统,测定代谢物的灵敏度和分离度提高了一倍。

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c. 未优化和优化LC-MS/MS系统对比:系统配置更改建议

1. 将微内径检测器流通池与内径- 2.1 mm 色谱柱配合使用

注:为减小谱带展宽体积而缩短流通池光程时,检测器灵敏度也会随之降低。

2. 尽可能减小样品定量环体积。

3. 在泵和进样器之间使用0.009英寸(0.25 mm)的管路。

4. 对于标准系统,其余连接也请使用0.009英寸(0.25 mm)的管路,对于窄径(内径2.1 mm)系统,其余连接请使用0.005英寸(0.12 mm)的管路。

5. 使用完全接合的(预切割)连接(如果使用不同供应商的色谱柱,请使用深度可调的入口)。

6. 检测器的时间常数应缩小至0.2 s以下。

 

d. 沃特世小粒径(3.5 -m)色谱柱-快速色谱分离

  填充3.5μm颗粒的沃特世色谱柱可实现更快速、更高效 的分离,而不会缩短色谱柱使用寿命。本节将介绍使用填充3.5μm颗粒的色谱柱进行分离时要考虑的5个参数。

注:为保留填料,填充3.5μ-m颗粒的色谱柱出口筛板较小。请勿反冲此类色谱柱。

1. 流速-3.5μm色谱柱的理想流速高于5μm色谱柱。使用此类色谱柱可以提高效率和缩短分析时间。但是,较高的流速会导致柱压增加。请使用适合系统的流速。

2. 柱压-3.5μm色谱柱的柱压高于同尺寸的5μm色谱柱。缩短色谱柱长度可抵消柱压增量,并缩短分析时间。

3. 温度-使用较高的温度可降低因粒径较小而产生的柱压(请参阅色谱柱维护和使用手册第III.f.节中建议的温度)。

4. 采样速率-请使用大约每秒10个数据点的采样速率。

5. 检测器时间常数-请使用0.1 s作为时间常数,以实现快速分析。


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